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如何恢復(fù)HPLC色譜柱性能?

更新時(shí)間:2021-09-15      點(diǎn)擊次數(shù):2080
  大家都知道HPLC色譜柱的壽命是有限的,在使用過(guò)程中隨著時(shí)間的推移,其性能開始下降。你可以通過(guò)峰形和峰形之間的分離,柱背壓的不規(guī)律增加以及重影峰的出現(xiàn)來(lái)判斷HPLC色譜柱的性能出現(xiàn)了下降。色譜柱是昂貴的色譜耗材,平常使用完畢后需要保養(yǎng)。如果色譜柱真的發(fā)生了性能下降,有什么方法可以恢復(fù)呢?
 
  首先,如果色譜柱由于過(guò)載或使用不兼容的流動(dòng)相而結(jié)垢,是可以恢復(fù)的,但已經(jīng)損壞的色譜柱或已經(jīng)過(guò)使用壽命的色譜柱無(wú)法恢復(fù),需要更換。
 
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色譜柱還原程序如下,供大家參考:
 
  反相柱
 
  反相分離是大多數(shù)HPLC分離中使用的主要操作模式。填料主要由C18,C4,CN,NH2和苯基固定相組成。建議以水-乙腈-異丙醇-庚烷-異丙醇-乙腈-流動(dòng)相的順序用10至20倍體積的溶劑洗脫
 
  正相柱(氨基,二醇,硝基,氨基固定相)
 
  用20倍體積的溶劑沖洗,按照庚烷-異丙醇-乙腈-水-異丙醇-庚烷的順序。
 
  GPC / GFC色譜柱
 
  用5倍體 積且PH值為3的0.1%磷酸鹽緩沖液沖洗。如果使用了保留力強(qiáng)的蛋白質(zhì),則使用從水到乙腈再到水的60分鐘梯度液沖洗。
 
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  色譜柱在使用前都要對(duì)其性能進(jìn)行考察,使用期間或放置一段時(shí)間后也要重新檢查,并將結(jié)果保存起來(lái),作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。柱性能指標(biāo)包括在一定實(shí)驗(yàn)條件下(樣品、流動(dòng)相、流速、溫度)下的柱壓、理論塔板高度和塔板數(shù)、對(duì)稱因子、容量因子和選擇性因子的重復(fù)性,或分離度。進(jìn)行柱效比較時(shí),還要注意柱外效應(yīng)是否有變化。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是最佳條件),只有這樣,測(cè)得的結(jié)果才有可比性。
 
  恒譜生色譜柱柱管由不銹鋼制成,不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過(guò)拋光,減小管壁效應(yīng),提高柱效,柱中填充鍵合硅膠或聚合物填料。色譜柱基于高純硅膠,采用*鍵合技術(shù),具有優(yōu)異的峰形,靈敏性好?;|(zhì)金屬含量低,對(duì)所有類型的分析物均表現(xiàn)完好峰形。機(jī)械強(qiáng)度高,穩(wěn)定性好,質(zhì)控嚴(yán)格,確保色譜柱性能和色譜柱的使用壽命。有多種尺寸規(guī)格可供選擇以適應(yīng)色譜工作者及其使用的不同需求。我們有專業(yè)的技術(shù)工程師團(tuán)隊(duì)為您的需求提供解決方案,歡迎前來(lái)咨詢了解!
 
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