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如何生成真實的液相色譜分析結(jié)果?

更新時間:2022-01-18      點擊次數(shù):2297

         作為一名液相色譜工作者,您最關(guān)心的還是生成真實實驗數(shù)據(jù),這些數(shù)據(jù)可以在任何其他實驗室的相同條件下被普遍接受和重現(xiàn)。如果忽視*的規(guī)范,即使使用最復雜的工具也無法達到目的。系統(tǒng)適用性是在化學分析中生成有效數(shù)據(jù)的關(guān)鍵。

        液相色譜法,是從事制藥、食品、法醫(yī)學、聚合物、生命科學和環(huán)境研究的實驗室中應用廣泛的技術(shù)。數(shù)以千計的高效液相色譜儀在制藥行業(yè)的研發(fā)和質(zhì)量控制實驗室工作,每天都會產(chǎn)生大量數(shù)據(jù),這有助于開發(fā)安全有效的藥物。在根據(jù)此類數(shù)據(jù)做出決策之前,HPLC 系統(tǒng)應滿足系統(tǒng)適用性的要求至關(guān)重要。

 

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        什么是系統(tǒng)適用性?系統(tǒng)適用性測試是色譜分析的重要組成部分。它們幫助我們確定檢測靈敏度、分辨率和重現(xiàn)性是否足以滿足所需的分析。美國藥典 (USP) 是原料藥色譜指南的來源。USP 第 621 節(jié)規(guī)定系統(tǒng)適用性測試是氣相和液相色譜分析的一個組成部分?;谶@樣的概念,設(shè)備、電子設(shè)備、分析操作和待分析的樣品構(gòu)成一個可以進行評估的整體系統(tǒng)。這意味著除非滿足系統(tǒng)適用性的要求,否則不接受任何樣品分析。

        導致HPLC 分析中系統(tǒng)適用性失敗的因素有很多,恒譜生總結(jié)了以下幾點:

        自動進樣器 – 由于無法準確提供設(shè)定體積的樣品和標準品,精度較差。

        色譜柱——老化的色譜柱或堵塞的色譜柱會由于理論塔板數(shù)減少而導致性能下降。色譜柱老化的情況有很多,也有存在柱頭污染導致色譜柱使用壽命縮短報廢的問題。

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        泵 – 由于操作部件的磨損而無法提供恒定流速的流動相。

        流動相 – 制備規(guī)定混合物時的錯誤和脫氣不*。

        樣品和參考制備 – 制備不準確或注射前未使用溶劑進樣口過濾器過濾。樣品雜質(zhì)和流動相雜質(zhì)一定要去除,否則進入液相系統(tǒng)會造成很多問題。在色譜柱前添加保護柱能夠有效預防雜質(zhì)污染柱頭,造成柱頭塌陷等問題。

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        需要多久進行一次系統(tǒng)適用性測試?根據(jù)監(jiān)管機構(gòu)的指導方針,系統(tǒng)適用性應符合整個色譜系統(tǒng)的要求,而不僅僅是單個模塊。每當設(shè)備或關(guān)鍵試劑系統(tǒng)發(fā)生重大變化時,應在樣品注入前進行適用性測試。系統(tǒng)失效時獲得的樣本分析結(jié)果對系統(tǒng)適用性的要求沒有意義。

        系統(tǒng)適用性必須在所有受監(jiān)管的測定之前和整個過程中進行。在色譜運行開始時應用適用性測試并假設(shè)系統(tǒng)將在運行期間正常運行是不夠的。包含主要成分和預期雜質(zhì)的測試混合物可以在開始時注入并在測試過程中散布。在面臨系統(tǒng)適用性失敗時,分析人員應立即停止分析。在診斷出問題并采取補救措施后,應重新進行適用性測試。只有在滿足所有系統(tǒng)適用性標準后才應恢復實際樣品的分析,而不僅僅是失敗的標準。

 

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