hplc色譜柱柱效高、分離能力強(qiáng)、保留機(jī)理清楚，是液相色譜分離模式中使用最為廣泛的一種，對(duì)于生物大分子、蛋白質(zhì)及酶的分離分析，反相液相色譜正受到熱烈歡迎。

　　色譜柱的保養(yǎng)

　　色譜柱使用一段時(shí)間后，常遇到柱子被污染，柱效會(huì)有一定程度的下降，采用適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)色譜柱進(jìn)行保護(hù)，可以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。

　　樣品和流動(dòng)相的處理：溶解的樣品進(jìn)樣前用濾膜過(guò)濾，以除去不溶物。如果必要，需進(jìn)行樣品的預(yù)處理。流動(dòng)相中如有不純物質(zhì)將影響柱效，所以溶劑盡量使用色譜的，少是分析純，流動(dòng)相使用前用微孔薄膜過(guò)濾。在流動(dòng)相的輸液管前安裝過(guò)濾器。過(guò)濾器定期用甲醇超聲清洗，如果效果不好，可用10%的稀硝酸浸泡清洗。對(duì)于堵塞嚴(yán)重的過(guò)濾器，可在火焰上灼燒后再清洗。

　　保護(hù)柱(預(yù)柱)的使用：對(duì)于較昂貴的色譜柱，可以在柱前加一保護(hù)柱，防止樣品中雜質(zhì)污染分析柱，對(duì)于制備柱，因其進(jìn)樣量大，使用保護(hù)柱尤為重要。

　　常規(guī)處理：硅膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱每一次用完后用低流速長(zhǎng)時(shí)間的二氯甲烷或正己烷等溶劑沖洗;鍵合相硅膠色譜柱、離子交換色譜柱和凝膠色譜柱先用蒸餾水沖洗，再用甲醇沖洗，然后用甲醇與蒸餾水以一定比例混合的溶液沖洗后過(guò)夜。

　　hplc色譜柱對(duì)于已使用一段時(shí)間后柱效下降的色譜柱可按以下方法進(jìn)行再生。再生處理包括活化(右→左)和凈化(左→右)兩種。硅膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱按下列順序沖洗：基戊烷或己烷←→三氯乙烷←→乙酸乙脂←→丙酮←→乙醇←→水。鍵合相硅膠柱：蒸餾水←→甲醇(沖洗過(guò)程中可加入少量二甲基甲酰胺)。離子交換樹(shù)脂柱：高濃度的NaCl溶液(1-2molL的NaCl溶液)可使大部分樹(shù)脂再生，油脂等少數(shù)與樹(shù)脂緊密結(jié)合的物質(zhì)可用低濃度堿溶液(如0.1molL的NaOH溶液)沖洗，酸性有機(jī)物吸附在固定相的用低pH緩沖液沖洗，堿性有機(jī)物用高pH緩沖液沖洗，然后再用蒸餾水←→甲醇←→二氯甲烷←→甲醇←→蒸餾水沖洗。凝膠色譜柱：由于凝膠色譜柱是根據(jù)被分離物質(zhì)的分子量大小而分離物質(zhì)，通常用稀的氫氧化鈉或非離子型去垢劑(0.2%-1%NP-40或Lubrol)沖洗可除去大部分的結(jié)合物質(zhì)，如果一些污染物仍然不能清除時(shí)，用24%或30%乙腈沖洗過(guò)夜可除去疏水蛋白，用30%-50%乙酸可除去親水蛋白，用蛋白水解酶處理可分解凝膠中剩余的痕量胃蛋白酶，然后再用蒸餾水←→甲醇←→蒸餾水沖洗。

　　已污染的色譜柱的處理：因保留強(qiáng)的物質(zhì)污染，流動(dòng)相或樣品中不溶物沉積于柱頭，可用下列方法洗滌：去除脂類可用四氫呋喃、乙腈或甲醇洗滌;去除蛋白質(zhì)可用乙腈、丙醇和1%CCl3COOH進(jìn)行梯度洗脫;一些高疏水性化合物可用乙腈或甲醇洗脫，同時(shí)反復(fù)注入100-200ml的四氫呋喃。

　　柱頭處理：對(duì)于hplc色譜柱柱頭堵塞污染嚴(yán)重的情況而且用溶劑沖洗無(wú)效的色譜柱，只有打開(kāi)柱子去除柱頂?shù)奶盍现匮b：先拆下不銹鋼燒結(jié)過(guò)濾器，檢查柱床，常見(jiàn)凹陷或受污染的帶色填料，剔去不規(guī)則床層和帶色填料，使柱床顯白色并*水平，再用甲醇作糊狀填料勻漿液，將糊狀填料勻漿液滴在柱上靠重力從勻漿液中排出甲醇液，重復(fù)直到填料水平。