在選擇
色譜填料時(shí)，需要考慮多種因素，以下是一些主要因素：
一、純化目標(biāo)和樣品特性
1.純化目標(biāo)：明確純化的具體目標(biāo)，如提高純度、去除雜質(zhì)、分離特定組分等。這將有助于選擇合適的填料和分離條件。
2.樣品性質(zhì)：了解待純化樣品的性質(zhì)，包括其極性、分子量、溶解性、穩(wěn)定性等。這些性質(zhì)將決定所需的填料類型和分離模式。
二、填料類型
色譜填料主要分為硅膠基質(zhì)填料、聚合物填料和其他無(wú)機(jī)填料等幾類。
1.硅膠基質(zhì)填料：
特點(diǎn)：硅膠是HPLC填料普遍的基質(zhì)，具有高強(qiáng)度和廣泛的適用性?？梢酝ㄟ^(guò)硅烷化技術(shù)鍵合各種配基，制成反相、離子交換、疏水作用、親水作用或分子排阻色譜。
適用范圍：適用于廣泛的溶劑，從極性到非極性。但需注意其在水溶性堿性流動(dòng)相中的不穩(wěn)定性，一般推薦在pH 2~8范圍內(nèi)使用。
2.聚合物填料：
特點(diǎn)：多為聚苯乙烯-二苯或聚丙烯酸脂等，具有寬pH使用范圍（pH 1~14），且在惡劣pH條件下不會(huì)降解。相對(duì)于硅膠基質(zhì)填料，聚合物填料具有較強(qiáng)的疏水性，對(duì)蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。
適用范圍：特別適用于需要高pH或溫度條件的純化過(guò)程。
3.其他無(wú)機(jī)填料：
如石墨化碳黑、氧化鋁、氧化鋯等，這些填料具有特殊的性質(zhì)，一般僅限于特殊的用途。例如，石墨化碳黑可用于分離某些幾何異構(gòu)體，氧化鋁可在高pH流動(dòng)相中使用，但需注意其與堿性化合物的強(qiáng)相互作用。
三、填料特性
1.粒度：粒度越小，柱效越高，但背壓也越大。因此，在選擇粒度時(shí)需要在柱效和背壓之間做出平衡。目前分析分離主要用3μm和5μm填料進(jìn)行。柱效提高意味著在相同條件下可以選用更短的色譜柱，從而縮短分析時(shí)間。
2.重現(xiàn)性：不同廠家或型號(hào)的填料可能表現(xiàn)出不同的選擇性，即使是同一廠家、同一牌號(hào)的填料及柱子的重現(xiàn)性有時(shí)也難以保證。因此，在選擇填料時(shí)需要考慮其重現(xiàn)性是否滿足需求。
3.穩(wěn)定性：填料的穩(wěn)定性也是選擇時(shí)需要考慮的重要因素之一。特別是在惡劣pH或溫度條件下使用時(shí)，需要選擇穩(wěn)定性好的填料以確保分離效果的一致性。
四、色譜柱參數(shù)
色譜柱的參數(shù)如內(nèi)徑、柱長(zhǎng)、孔徑等也會(huì)對(duì)填料的選擇產(chǎn)生影響。
1.內(nèi)徑：內(nèi)徑越小，溶液在柱內(nèi)的流通路徑越短，擴(kuò)散速率越高，能有效抑制峰展寬。高效液相色譜儀通常使用4.6mm和2.1mm的內(nèi)徑。
2.柱長(zhǎng)：色譜柱的長(zhǎng)度與理論塔板數(shù)N成正比，更長(zhǎng)的柱長(zhǎng)意味著更高的分離度，但運(yùn)行時(shí)間也會(huì)相應(yīng)延長(zhǎng)。常用的色譜柱長(zhǎng)度為150mm和250mm。
3.孔徑：孔徑越小，含孔量越高，比表面積和載碳量也越大，確保分子能順利進(jìn)出填料孔并與孔內(nèi)表面進(jìn)行分離分配。大分子使用300A孔徑，小分子則使用80~120A孔徑。
在選擇色譜填料時(shí)，需要綜合考慮純化目標(biāo)、樣品特性、填料類型及其特性以及色譜柱參數(shù)等多個(gè)因素。
多譜檢測(cè)純化解決方案供應(yīng)商
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